Efeitos imunorregulatórios do antígeno solúvel de toxoplasma Gondii em células dendríticas in vitro

Abstract

Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório cuja resposta adaptativa é fortemente TH1. Apesar desta forte resposta TH1, existem fortes evidências da produção de mecanismos imunoregulatórios como a produção de IL-10. Além de participar do controle da resposta adaptativa a IL-10 é produzida durante a resposta imune inata. Esta resposta é caracterizada pela participação de células como macrófagos, células dendríticas e citocinas como IL-12 e TNF-α. A interação entre estas células e o parasito, para a produção destas citocinas, parece ser intermediado por receptores da imunidade inata do tipo Toll: Os receptores Toll Like. A literatura não deixa muito claro qual o verdadeiro papel do Toll Like 4 na interação entre T. gondii e células dendríticas. O nosso geral objetivo foi demonstrar o efeito da interação de células dendríticas humanas e o antígeno solúvel de T. gondii e qual o envolvimento do TLR-4 na resposta imunológica contra T. gondii. Foram utilizadas células dendríticas humanas e antígeno solúvel de T. gondii. Após 48 horas da interação das células com antígeno foram avaliados marcadores de maturação e produção de citocinas como a IL-10 e IL-12. A produção de Il-12 foi também avaliada após a interação das células dendríticas com células J558(mimetizam ligação CD40-CD40L) e a expressão de IL-10, IL-12 e TFG-b foi avaliada por PCR. No primeiro artigo, portanto, demonstramos que o antígeno solúvel do parasito estimulou marcadores de maturação CD40(p<0,05), CD80(p<0,05), CD83 (p<0,01), CD86(p<0,05) e HLA-DR (p < 0,05). Produziu significativamente IL-10(p < 0,01) e IL-12(p< 0,05), mas a produção de IL-10 é superior a de IL-10/IL-12(p < 0,01). A IL-12 não foi produzida quando as células dendríticas estiveram em contato com a linhagem de células J558. A expressão de IL-10 (p < 0,01) e de IL-12 (p < 0,01) por PCR foi também observada quando as células dendríticas tiveram contato com o antígeno. A expressão de TGF-b não foi observada. No segundo artigo, no qual bloqueamos o TLR-4 nas células dendríticas a produção de IL-10 e IL-12 foram avaliadas. Foi possível demonstrar que o bloqueio deste receptor impede a produção de IL-10(p < 0,05) e IL-12(p < 0,05). Sendo assim este Toll Like é importante para a resposta inata contra o parasito, mas também é importante para a resposta regulatória demonstrada no primeiro trabalho. Neste trabalho de tese concluímos que o antígeno solúvel dos taquizoítos do parasito T. gondii é capaz de estimular resposta pró-inflamatória e anti-inflamatória através das células dendríticas e que a produção de IL-10 é superior a de IL-12. Concluímos ainda que a produção destas citocinas esta associada ao receptor Toll Like 4.

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite whose adaptive response is strongly TH1. Despite this strong TH1 response, there is strong evidence of the production of immunoregulatory mechanisms, such as IL-10 production. Besides participating in the control of adaptive response to IL-10 is produced during the innate immune response. This response is characterized by the involvement of cells such as macrophages, dendritic cells and cytokines such as IL-12 and TNF-α. The interaction between these cells and the parasite, for the production of these cytokines appears to be mediated by the innate immunity receptor Toll like, Toll like receptors. The literature does not very clear what the true role of Toll like 4 in the interaction between T. gondii and dendritic cells. Our main objective was to demonstrate the effect of the interaction of dendritic cells and human soluble T. gondii antigen and which involvement of TLR-4 in immune response against T. gondii. Human dendritic cells and soluble T. gondii antigen were used. After 48 hours the interaction of antigen with cell maturation markers were evaluated and the production of cytokines such as IL-10 and IL-12. The production of IL-12 was also evaluated after the interaction with dendritic cells J558 cells (CD40-CD40L binding mimic), and the expression of IL-10, IL-12 and b-GFR was assessed by PCR. In the first article, thus demonstrated that soluble parasite antigen-stimulated maturation markers CD40 (p <0.05), CD80 (p <0.05), CD83 (p <0.01), CD86 (p <0, 05) and HLA-DR (p <0.05). IL-10 produced significantly (p <0.01) and IL-12 (p <0.05), but IL-10 production is higher than the IL-10 / IL-12 (p <0.01). IL-12 was not produced when dendritic cells were in contact with the line of J558 cells. The IL-10 expression (P <0.01) and IL-12 (p <0.01) by PCR was also observed when dendritic cells had been in contact with the antigen. The TGF-b was not observed. In the second article, in which block the TLR-4 dendritic cells IL-10 and IL-12 were assessed. It has been shown that blockade of this receptor prevents IL-10 production (p <0.05) and IL-12 (p <0.05). Thus, this Toll like is important for the innate response against the parasite, but it is also important for the regulatory response demonstrated the first working. In this thesis work we conclude that the soluble antigens of the parasite tachyzoites of T. gondii is able to stimulate pro-inflammatory and anti-inflammatory response by dendritic cells and IL-10 production is higher than that of IL-12. We conclude that the production of these cytokines is associated with a Toll like receptor 4