Avaliação da imunoreatividade in vitro de antígenos secretados de corynebacterium pseudotuberculosis em amostras de sangue de indivíduos com tuberculose pulmonar ativa

Abstract

A tuberculose (TB), causada pelo Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) descoberto por Robert Koch, em 1882, é uma doença infectocontagiosa que acomete, principalmente, os pulmões. Apesar da TB ser uma doença milenar, continua sendo grave problema de saúde pública em várias regiões do mundo. Algumas biomoléculas podem ser compartilhadas por diferentes agentes biológicos, como o M. tuberculosis e Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis), que podem ser usadas em modelos de estudos por reação cruzada, para avaliação de resposta imune e testes diagnósticos. Adicionalmente, pela semelhança entre alguns fatores de virulência/patogenicidade dessas bactérias, confirmados por análise de bioinformática, objetivou-se usar extratos de cepas de C. pseudotuberculosis semi-purificados para investigar sua capacidade antigênica in vitro, no modelo proposto com amostras de indivíduos com diagnóstico de tuberculose pulmonar ativa. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa ICS-UFBA (CAAE 57662016.8.1001.5662) e todos os indivíduos participantes assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Participantes voluntários do atendimento do Hospital Especializado de doenças pulmonares da Bahia, com diagnóstico de TB e sem tratamento (n=35) e participantes adultos, sem queixa, sem história ou sintomatologia de TB ou de infecção por M. tuberculosis (n=35). Com o sangue heparinizado, após leucograma, procedeu-se o estímulo em placa, utilizando-se mitógeno (PWM), e antígenos de extrato protéico de C. pseudotuberculosis (cepas PAT-10, VD57 e FRC-41). Para a dosagem das citocinas utilizou-se o BD Cytometric Bead Array (CBA) Human Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit e o BD™ CBA Human IP-10 Flex kit. As análises foram feitas no software FCAPArray™. Os extratos das cepas PAT10, VD57 e FRC41, induziram a produção das citocinas estudadas nas amostras de sangue nos grupos estudados. Além disso, diferenciaram os grupos de estudo quando comparados com a concentração de IFN-γ e IP-10, sob estímulo com PAT10; IFN-γ, IL-2 e IL-6, sob estímulo com VD57 e IP-10 e IL-4, sob estímulo com FRC41. Os extratos das cepas PAT10, VD57 e FRC41 de C. pseudotuberculosis semi-purificados induzem a produção de IFN-γ, IP-10, TNF, IL-2, IL-6 e IL-10 nas amostras de sangue de indivíduos infectados com M. tuberculosis. Sob o estímulo dos extratos utilizados, a detecção de IFN-γ e IP-10, diferencia os grupos controle e TB ativa.

Tuberculosis (TB) is caused by Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis), that was discovered by Robert Koch in 1882, is an infectious disease that mainly affects the lungs. Although TB is a millennial disease, it remains a serious public health problem in several regions of the world. Biomolecules can be shared by different biological agents, such as M. tuberculosis and Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis), which can be used in cross-reactive studies, for the evaluation of immune response and diagnostic tests. Additionally, by means of some virulence/pathogenicity factors, confirmed by bioinformatics analysis, it was objectified using extracts of semi-purified C. pseudotuberculosis strains to investigate their antigenic capacity in vitro, in a proposed model with samples of patients with diagnosis of active pulmonary tuberculosis. This study was approved by the Research Ethics Committee ICS-UFBA (CAAE 57662016.8.1001.5662) and all participants signed a Free and Informed Consent Term. Voluntary participants of the Hospital of the Specialized Hospital of pulmonary diseases of Bahia, with diagnosis of TB and without treatment (n = 35) and participants adults, without complains, no history or symptomatology of TB or of M. tuberculosis infection (n = 35). With heparinized blood, after leukogram, the plate stimulation was carried out using mitogen (PWM), C. pseudotuberculosis protein extract antigens (PAT-10, VD57 and FRC-41 strains). For a dosage of the cytokines were use BD Cytometric Bead Array (CBA) Th1 / Th2 / Th17 Cytokine Kit and the BD ™ CBA Human IP-10 Flex kit. Analyzes were performed with FCAPArray™ software. Extract antigens PAT-10, VD57 and FRC-41 strains induced the production of the cytokines in the blood samples in the studied groups. In addition, they differentiated the study groups when compared to IFN-γ and IP-10, under stimulation with PAT10; IFN-γ, IL-2 and IL-6, under stimulation with VD57 and IP-10 and IL-4, under stimulation with FRC41. The extracts from C. pseudotuberculosis strains PAT10, VD57 and FRC41 induce the production of IFN-γ, IP-10, TNF, IL-2, IL-6 and IL-10 in blood samples from individuals infected with M. tuberculosis. Under the stimulus of the extracts used, the detection of IFN-γ and IP-10 differentiates the control and active TB groups.