Metodologias de quantificação do crescimento bacteriano e a cinética em cultura líquida na presença de BTX: subsídios na biorremediação de áreas impactadas por atividades petrolíferas

Abstract

O sucesso de uma pesquisa científica depende da escolha de uma metodologia compatível com a finalidade do trabalho. O método de pesquisa a ser adotada é uma escolha do pesquisador, porém deve estar em sintonia com os objetivos do trabalho e de acordo com a questão que se pretende investigar. As atividades industriais apresentam riscos ambientais inerentes, que precisam ser constantemente gerenciados. No intuito de colaborar com pesquisas voltadas para biorremediação de áreas impactadas por atividades petrolíferas, este estudo buscou avaliar duas metodologias (contagem em placas e turbidimetria) aplicadas na quantificação do crescimento bacteriano por meio de experimentos realizados em cultura líquida na presença de BTX. Foram utilizadas bactérias provenientes de sedimentos de manguezais, que demonstraram alto potencial na degradação de derivados do petróleo, com ênfase nos hidrocarbonetos monoaromáticos BTX (benzeno, tolueno e xileno). Os testes de cinética foram realizados com seis bactérias na presença de BTX, isoladamente, no decorrer de 12 horas. O experimento foi dividido em três etapas (dias), sendo elas: preparação do inoculo (dia 1), amostragem (dia 2) e contagem das UFC (dia 3). As amostragens foram efetuadas nos tempos T0, T2, T4, T5, T6, T7, T8, T10 e T12, onde alíquotas da suspensão bacteriana foram medidas, em triplicatas, pelos dois métodos de quantificação. Testes de consumo de oxigênio foram efetuados pela técnica de medição da respiração total da cultura após 12 horas, 24 horas e 48 horas. Nos testes de cinética em cultura líquida as cepas apresentaram maiores velocidades na presença de xileno e tolueno, quando na presença de benzeno. Os resultados dos testes de consumo de oxigênio demonstram melhores resultados na presença de xileno, seguida do benzeno e por último o composto tolueno. Houve maior diversidade microbiológica na área de transporte, seguida da área de refino, com menor variedade bacteriana existente na área de produção da cadeia petrolífera. As cepas apresentaram maior rapidez em dobrarem suas populações (tempo de geração) na presença de xileno e benzeno, quando comparado ao tolueno. A partir da análise dos resultados concluiu-se que não houve diferença significativa entre os métodos avaliados, sendo ambas metodologias eficazes na quantificação do crescimento bacteriano em cultura líquida na presença de BTX.

The success of a scientific research depends the choice of methodology compatible with the purpose of the work. The research method to be adopted is a choice of the researcher, but should be in line with the objectives of the study and according to the question whether to investigate. Industrial activities have inherent environmental risks that need to be constantly managed. In order to collaborate with research focused on bioremediation of areas impacted by oil activities, this study aimed to evaluate two methods (plate count and turbidity) applied to the quantification of bacterial growth through experiments in liquid culture in the presence of BTX. Bacteria from sediments of mangroves were used, which demonstrated high potential in petroleum products of degradation, with emphasis on monoaromatic hydrocarbons BTX (benzene, toluene and xylene). The kinetics tests were carried out to six bacteria in the presence of BTX alone during 12 hours. The experiment was divided into three stages (days), as follows: preparation of the inoculum (day 1), sampling (day 2) and counting of UFC (day 3). The samples were taken at the times T0, T2, T4, T5, T6, T7, T8, T10 and T12, where rates of bacterial suspension were measured in triplicate by the two quantification methods. Oxygen consumption assays were performed by measurement of the total breathing technique culture after 12 hours, 24 hours and 48 hours. Rates of bacterial suspension were measured in triplicate by the two quantification methods. In kinetic tests, in liquid culture, the strains showed higher rates in the presence of xylene and toluene, than in the presence of benzene. The results of oxygen consumption tests show better results in the presence of xylene and benzene and finally toluene compound. There was a higher microbial diversity in the transport area, followed by refining area, less existing bacterial variety in the production area of the oil chain. The strains showed faster in double their populations (generation time) in the presence of xylene and benzene, compared to toluene. From the analysis of the results it was concluded that there was no significant difference between the methods evaluated, being both effective methodologies in quantifying bacterial growth in liquid culture in the presence of BTX.