Avaliação da associação entre genótipos da Leishmania (Viannia) braziliensis e desfechos da Leishmaniose Tegumentar Americana

Abstract

Introdução A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) pode resultar de infecções humanas com Leishmania (Viannia) braziliensis, a qual é responsável por três formas de doença: leishmaniose cutânea (LC), mucosa (LM) e disseminada (LD). Essas três formas da doença podem ser encontradas em Corte de Pedra (CP), Bahia/Brasil. A ocorrência desses diferentes desfechos da doença nesta área endêmica, sugere que a cepa parasitária exerça um importante papel sobre a determinação do prognóstico da infecção. Objetivos Buscamos avaliar a dinâmica na constituição genotípica da população parasitária de L. (V.) braziliensis ao longo do tempo, sua associação com os desfechos clínicos de LTA em Corte de Pedra-BA, e se a carga parasitária está relacionada com a gravidade da doença. Métodos DNA total foi obtido a partir da suspensão de L. (V.) braziliensis isoladas de sujeitos com LC, LM ou LD pertencentes a duas amostras temporalmente distintas: Amostra A, 35 sujeitos recrutados entre 1992 e 2001; Amostra B, 126 sujeitos recrutados entre 2008 e 2011. Dois loci polimórficos (CHR24/3074 e CHR28/425451) dessas L. (V.) braziliensis foram amplificados por PCR, clonados, sequenciados e seus genes comparados entre os parasitas das duas amostras, para a caracterização de seus alelos. Esses loci foram explorados para avaliar a associação entre genótipos do parasita e as formas clínicas da doença. Um total de 194 amostras de DNA do parasita obtidos a partir de biópsias de lesões dos pacientes com LTA foram quantificadas por qPCR e utilizadas para avaliar a associação entre a carga parasitária e as manifestações clínicas da LTA. Resultados Identificamos no CHR24/3074 11 eventos de polimorfismos (SNP’s e Indel’s) e um total de 15 haplótipos de acordo com as nossas definições, sendo que 4 apresentaram-se mais frequentes. Já o locus CHR28/425451 apresentou 3 eventos polimórficos com um total de 7 haplótipos, dos quais 3 mantiveram-se consistentes entre as amostras A e B. Quatro haplótipos foram detectados exclusivamente na amostra mais recente, B. A avaliação da carga parasitária revelou que a alta carga pode estar associada à resposta terapêutica dos pacientes. Conclusão As avaliações entre genótipos parasitários e os fenótipos da LTA confirmaram estudos anteriores, mostrando associação entre os genótipos e desfechos clínicos da doença. Além disso, pudemos constatar como a qPCR pode ser eficaz para quantificação da carga parasitária, e esta pode exercer um papel importante na resposta terapêutica desses pacientes.

Introduction American tegumentary leishmaniasis (ATL) can result from human infections with Leishmania (Viannia) braziliensis, which is responsible for three forms of disease: cutaneous leishmaniasis (CL), mucosa (ML) and disseminated (DL). These three forms of the disease can be found in Corte de Pedra (CP), Bahia /Brazil. The occurrence of these different disease outcomes in this endemic area suggests that the parasitic strain plays an important role in determining the prognosis of the infection. Objectives We sought to evaluate the dynamics in the genotypic constitution of the parasitic population of L. (V.) braziliensis over time, its association with the clinical outcomes of ATL in the of Corte de Pedra-BA, and whether the parasitic load is related to the severity of the disease. Methods Total DNA was obtained from the suspension of L. (V.) braziliensis isolated from subjects with LC, LM or LD belonging to two temporally distinct samples: Sample A, 35 subjects recruited between 1992 and 2001; Sample B, 126 subjects recruited between 2008 and 2011. Two polymorphic loci (CHR24/3074 and CHR28/425451) of these L. (V.) braziliensis were amplified by PCR, cloned, sequenced and their genes compared between the parasites of the two samples, to the characterization of their alleles. These loci were explored to evaluate the association between genotypes of the parasite and the clinical forms of the disease. A total of 194 parasite DNA samples obtained from lesions biopsies of patients with ATL were quantified by qPCR and used to evaluate the association between parasite load and clinical manifestations of ATL. Results We identified in the CHR24/3074 11 polymorphism events (SNP's and Indel's) and a total of 15 haplotypes according to our definitions, 4 of which were more frequent. The CHR28/425451 locus presented 3 polymorphic events with a total of 7 haplotypes, of which 3 remained consistent between samples A and B. Four haplotypes were detected exclusively in the most recent sample, B. The parasite load evaluation revealed that the high load may be associated with the therapeutic response of the patients. Conclusion Evaluations between parasite genotypes and ATL phenotypes have confirmed earlier studies showing association between genotypes and clinical outcomes of the disease. In addition, we have verified how qPCR can be effective for the quantification of the parasite load, and this can play an important role in the therapeutic response of these patients.