Genes de resposta imune no desenvolvimento de episódios reacionais na hanseníase

Abstract

A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, sendo influenciada por fatores genéticos e ambientais. Essa infecção possui um vasto espectro clínico e imunológico podendo causar aos pacientes grandes morbidades, o que tem um alto impacto na saúde pública. OBJETIVOS: avaliar se marcadores nos genes IL-6, NOD2, CCL2 e LTA4H estão associados ao desenvolvimento de reações hansênicas; Avaliar os padrões de expressão de genes relacionados à resposta imune e sua associação com o desenvolvimento de episódios reacionais; Identificar possíveis biomarcadores sorológicos para reações hansênicas comparando a produção de citocinas e quimiocinas no soro de pacientes com e sem reações. MÉTODOS: Para a genotipagem de SNPs foram utilizados ensaios Taqman® pré-desenhados para os genes CCL2 (rs2857656, rs1024611, rs4795893), IL6(rs2069845), NOD2(rs751271) e LTA4H(rs1752549) em 432 pacientes sendo 163 pacientes sem reação (SR), 134 com reação reversa (RR), e 127 com eritema nodoso leproso (ENL) e 8 com RR e ENL; a genotipagem dos marcadores foi realizada pelo ViiA™ 7 Real-Time PCR System. Para o estudo da expressão gênica foi realizado o PCR em tempo real no sistema BioMark® (Fluidigm, EUA), utilizando um painel de 94 genes para análise simultânea de cDNA de 151 amostras de pacientes divididas em três grupos: 57 sem reação (SR), 50 RR e 44 ENL. O sistema permitiu identificar genes diferencialmente expressos obtidos a partir de leucócitos totais. A dosagem de proteínas séricas foi feita pela técnica ELISA sanduíche em 69 pacientes com hanseníase sendo 24 indivíduos SR; 23 RR e 22 ENL. Os dados foram analisados pelos testes de MannWhitney, utilizando o programa GraphPadPrism, e o Ambiente R. RESULTADOS: Dados da genotipagem mostraram associações entre os marcadores genéticos do gene CCL2 (rs2857656, rs1024611) quando comparados grupos RR versus SR (p<0,05); Dez genes de resposta imune foram significativamente associados quando comparados pacientes SR versus pacientes reacionais (ENL e RR) - CCL2, PARK, ALOX5, TLR7, LRRK2, IFNB, TLR10, IL18, TLR3, CLEC5A, p<0,05. Este mesmo perfil de expressão se replicou nas comparações entre os grupos RR versus paucibacilares e RR versus SR, acrescido de outros genes como o OAS1(p<0,05) que se mostrou específico nas comparações envolvendo o grupo RR. Apenas o gene PARK foi associado significativamente na comparação entre pacientes com ENL versus SR (p<0,05); Na análise sorológica, a concentração de IL-8 foi maior nos pacientes com reação hansênica e também quando divididos em ENL e RR quando comparados ao grupo sem reação. CONCLUSÃO: Nossos estudos investigando marcadores no DNA e no RNA evidenciam que o gene CCL2 pode estar implicado com o desenvolvimento de RR; este tipo de reação também possui um perfil caracterizado pela maior expressão de genes inflamatórios. No estudo imunológico, demonstramos IL-8 como um marcador no soro para reações hansênicas.