A multicommuted flow procedure for the determination of total and free cholesterol in eggs and human blood serum by chemiluminescence

Abstract

Um sistema de análises em fluxo com multicomutação com detecção por quimiluminescência foi desenvolvido para a determinação de colesterol livre e total sem alterações no módulo de análises. Colesterol estearase e colesterol oxidase foram imobilizadas em esferas de vidro via glutaraldeído/3-aminopropiletoxisilano e mini-colunas contendo as enzimas foram usadas para tratamento das amostras em linha. Ésteres de colesterol foram clivados a colesterol e ácidos graxos na coluna empacotada com colesterol estearase. No reator contendo colesterol oxidase, o analito foi convertido a 4-colesten-3-ona e peróxido de hidrogênio. A detecção foi baseada na quimiluminescência produzida por H2O2 no sistema hexacianoferrato(III)-luminol. Os efeitos de variáveis químicas e hidrodinâmicas sobre o sinal de quimiluminescência foram avaliados. As curvas analíticas foram lineares entre 250 e 2500 mg L-1 e 500 e 4000 mg L-1, para colesterol livre e total, respectivamente. Limites de detecção para ambos os analitos foram estimados em 60 mg L-1 (99,7% de confiança). A frequência de amostragem foi de 55 h-1 e o consumo de reagentes foi de 350 µg de luminol e 2,6 mg de hexacianoferrato(III) de potássio por determinação. O procedimento desenvolvido foi aplicado à determinação de colesterol em ovos e soro sanguíneo humano gerando resultados concordantes com o procedimento espectrofotométrico de referência com nível de confiança de 95%.