Variabilidade genética de cryptococcus ambientais na cidade do Salvador – BA

Abstract

Cryptococcus é uma levedura zoonótica, frequentemente associada a excretas de pombos e seu isolamento já é relatado em todo o mundo. Trata-se de uma levedura encapsulada, de forma globosa ou ovalada, que apresenta acentuado tropismo pelo sistema nervoso central. O principal problema é que o fungo permanece viável em excretas secas dessas aves por um longo período, tornando-se um reservatório de partículas infectantes passíveis de serem inaladas. O trabalho teve como objetivo caracterizar a variedade fenotípica e genética de Cryptococcus spp. ambientais da cidade de Salvador, Bahia. Para a execução desse estudo, 200 amostras de excre-mentos secos de pombos foram coletadas no solo entre novembro 2011 e fevereiro de 2012, em praças públicas, centro de distribuição de alimentos e no Porto da cida-de Salvador, Bahia. Foram adicionados 4mL de solução salina esterilizada, acresci-da de cloranfenicol, para cada 1g de excreta. A mistura foi submetida à agitação em vortex por 3 minutos, e mantida em repouso por 60 minutos e, em seguida, diluições foram feitas. Foram aspirados 0,1 mL do sobrenadante e semeados com alça de Drigalski, de cada diluição, em placas de ASD contendo cloranfenicol. As placas fo-ram incubadas em estufa de demanda de oxigênio a 28oC por até 21 dias. Colônias sugestivas foram repicadas em caldo uréia e analisadas com tinta da China para pesquisa de cápsula e micromorfológica com coloração de Gram. Após a identifica-ção do gênero, as leveduras foram identificadas bioquimicamente por auxanograma, zimograma, crescimento a 37ºC e repicadas em ágar Níger (Guizotia abyssinica), e CGB. Foram isoladas 37 leveduras, das quais 22 são da espécie C. neoformans, 4 de C. gattii, 5 de C. albidus, 3 de C. uniguttulatus e 3 da espécie C. laurentii. A de-terminação dos genótipos foi realizada utilizando a técnica de PCR-RFLP do gene URA5 e foram verificados os perfis moleculares VNI (53,8%), VNIII (11,5%), VNIV (19,2%), VGII (7,7%), VGIII (3,8%) e VGIV (3,8%). A positividade para Cryptococcus nas amostras encontradas nos locais de estudo, associado ao grande número de pombos, apontam para a existência de riscos ambiental que devem servir de alerta aos órgãos de vigilância sanitária em Salvador. A identificação de espécies como C. gattii, C. albidus, C. uniguttulatus e C. laurentii em excretas de pombos evidencia a importância de novos estudos epidemiológicos para traçar os perfis de espécies de Cryptococcus que podem ser detectados de fontes ambientais em nossa cidade.